Taq DNA連接酶試劑是一種熱穩(wěn)定性連接酶，能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補(bǔ)靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端通過(guò)磷酸二酯鍵相連。該連接反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷酸鏈與互補(bǔ)靶 DNA 配對(duì)，并且兩條寡核苷酸鏈之間沒(méi)有空隙的條件下才可發(fā)生（nicking DNA連接）。因此，可以用它來(lái)檢測(cè)單堿基替換。在 45℃-70℃ 范圍內(nèi)，Taq DNA 連接酶均有活性。該酶經(jīng)耐熱性改造在95℃加熱5min后仍然保留全部活性。

應(yīng)用

雙鏈DNA切刻的修復(fù)

用于Gibson組裝方法的建立

具有的耐熱性，適用LCR反應(yīng)（Ligase Chain Reaction）

適用MLPA反應(yīng)（Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification）

活性定義

1單位指 20μl反應(yīng)體系中，50℃條件下，15分鐘內(nèi)能使50%的1pmol的接頭片段（12 bp 粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量。

儲(chǔ)存

-20℃可保存兩年

Taq DNA連接酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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