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流式抗體(熒光抗體)細胞染色步驟與注意事項

更新時間:2024-09-23      點擊次數(shù):476

流式抗體(熒光抗體)細胞染色步驟與注意

染色緩沖液(BSA)的配制:


PBS含有1% FBS和0.09% NaN3,置于冰上或4度冰箱備用。


準備單細胞懸液:淋巴組織、骨髓、血液或培養(yǎng)的細胞。


用冰染色緩沖液洗細胞2次,離心細胞,用冰染色緩沖液重懸細胞,使終濃度為2×107細胞/ml。


各取50ul(106細胞)細胞懸液到2個圓底的Ep管中。


根據(jù)抗體說明書在其中1個Ep管中加入合適的抗體量,另外1個加入同型對照抗體,冰上避光孵育20分鐘(建議每5分鐘輕輕混勻,以免細胞沉積)。根據(jù)熒光抗體的親和力適當延長染色時間。


用1ml染色緩沖液洗2次去除未結合的抗體,300×g離心5分鐘,每次離心后小心吸取上清。


用適量染色緩沖液(如500ul)重懸細胞。


流式細胞儀分析染色結果(不超過4小時)。如果暫時無法檢測,也可以將染色后的細胞用4%多聚甲醛固定后,避光儲存在4度。固定后的細胞可以保存zui多一個星期。


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