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熒光定量PCR簡介及原理

更新時間:2024-03-18      點擊次數(shù):584

熒光定量PCR簡介


熒光定量PCR檢測技術誕生至今已10多年的時間,而其應用一直都沒廣泛展開,究其原因,無外乎受制于相關儀器、試劑和技術的發(fā)展

。近期,尤其是08年以來,儀器和試劑是遍地開花,這也使科研人員均躍躍欲試,都想借此技術使自己的研究能突飛猛進,

發(fā)展勢頭通過查找每年所發(fā)表的文章數(shù)可一目了然。據(jù)有關統(tǒng)計,在 Medline 數(shù)據(jù)庫中,用“Taqman" 或 "real time PCR"

作為關鍵詞檢索,1996 年是19 篇,1999 年157 篇,到2003 年就高達2984 篇,2009年會是多少呢?我們不得而知

但其迅猛的發(fā)展勢頭卻是不可更改的,本公司真誠希望能和眾多研究人員共同努力,抓住這一大好時機,為科研事業(yè)的發(fā)展貢獻自身的

力量?;谶@一目標,本公司長期以來對熒光定量PCR,無論是技術還是多年來的產品,均進行了深入地研究,

并及時推出更加優(yōu)異的熒光定量 PCR技術服務。


熒光定量PCR原理


熒光定量PCR最早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量

技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應的進行,

PCR反應產物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化

監(jiān)測產物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。

13.png

一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,

擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化。而在平臺期,擴增產物已不再呈指數(shù)級的增加,

PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系,根據(jù)最終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。

只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。

為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值


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